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CFX96 實時熒光定量PCR儀操作流程及注意事項
發表日期:2012-06-29
 開始運行儀器

打開電腦

打開定量PCR儀底座開關

啟動CFX Manager軟件

 放置樣品

將PCR反應體系加入到0.2ml低緣八聯管,蓋上管蓋;或加入低緣96孔板,用光學級封膜封好。注意,必須帶一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應管表面。將反應管按順序放入儀器的加熱孔中。  

 設置程序,運行實驗

定量PCR軟件操作基本步驟為:a. 設置熱循環程序文件(Protocol Tab)   b.設置反應板文件(Plate Tab)。 C.點擊“Start Run”鍵,運行程序熱循環程序文件(Protocol Tab)設置指南:點擊Edit(編輯)或 Create New(創建新程序)。

反應板設置文件(Plate Tab)設置指南:選擇本次實驗所要使用的熒光染料種類;單擊樣品類型;如要某些反應孔第一熒光染料對應的樣品類型為標準品(Standard),點擊“Dilution Series”鍵可設置其標準品濃度及稀釋倍數。

點擊“Start Run”鍵。單擊open lid(打開熱蓋)或Close lid(關閉熱蓋)放置樣品;單擊Start Run,保存文件,開始運行程序。

 結果分析

PCR反應結束后,軟件會自動計算標準曲線和Ct值等。

如需進行表達量分析、等位基因分析等, 在軟件窗口選擇相應分析功能。

點擊右上方的“Report”鍵,還可輸出結果報告單

 

 關閉運行儀器

實驗結束后取出反應管,順序關閉CFX Manager軟件、定量PCR儀電源,關閉電腦。注意!CFX儀器上蓋部分為全自動控制,在通電狀態,嚴禁任何人為干涉上蓋開啟或關閉的行為,此類行為會導致上蓋故障,危及儀器使用。

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